概要

本品は、ヒト免疫グロブリンLambda軽鎖定常領域をコードするmRNA配列に相補的なプローブである。ヒト免疫グロブリンにはKappa(κ)軽鎖とLambda(λ)軽鎖の2種類の軽鎖が存在し、κ：λの比率はヒトではおよそ2：1である⁽¹⁾。κ及びλ軽鎖の比率の偏り(軽鎖制限)の検出は、単クローン性増殖の確認に用いられ、これらは形質細胞腫瘍やB細胞リンパ腫などの判別に有用である^(2)～(9)。Chromogenic in situ ハイブリダイゼーション(CISH)法による免疫グロブリンλ軽鎖の染色は、形質細胞や一部のB細胞の細胞質内のλ軽鎖のmRNA を検出する⁽⁶⁾⁽⁷⁾。免疫組織化学染色(IHC)法では、形質細胞やB細胞などの細胞のほか、血清中のλ軽鎖タンパク質などを検出するためバックグラウンド染色が高くなる場合がある^(4)(6)(7)。一方、CISH法は、mRNAを検出するため、バックグラウンド染色が起こる可能性が低く、IHC法によるバックグラウンド染色が高い場合に有用である^{(3)(4)(6)～(8)}。

測定原理

in situ ハイブリダイゼーション(ISH)法は、組織又は細胞における特定の核酸配列に相補的なオリゴヌクレオチドプローブをハイブリダイゼーションすることで、その局在を検出する技術である。ISH法の一つであるChromogenic in situ ハイブリダイゼーション(CISH)法は、ハプテン等で標識されたプローブをハイブリダイゼーションさせ、その後酵素を標識した抗ハプテン抗体等を反応し、その酵素活性を利用して色素原(Chromogen)を発色させる。光学顕微鏡下で組織形態と標的核酸の局在を同時に観察可能にする染色法である。

Lambda CISHの染色操作は、自動染色装置ヒストステイナーATを用いて行う。初めにホルマリン固定パラフィン包埋された組織又は細胞中の標的核酸配列に相補的なISHプローブ^※1をハイブリダイゼーションさせる。次に酵素と抗体を結合させたアミノ酸ポリマー（CISH検出試薬A^※2)を反応させ、さらに架橋試薬（CISH検出試薬B^※2)を反応させた後、抗体と酵素を結合させたアミノ酸ポリマー(CISH検出試薬C^※2)を反応させる。その結果、標的核酸・プローブ・CISH検出試薬 A・B・C の複合体を形成することができる。この複合体の酵素活性と基質を利用してDAB沈殿物を生成し呈色させる。Lambda CISHでは、標的核酸であるλ軽鎖mRNA を可視化することで、光学顕微鏡により形質細胞や一部B細胞の細胞質内のλ軽鎖mRNAの発現を確認することができる。


※1　Lambda-CISHプローブ(AT用)
※2　BRIGHTEST-CISH(AT用)　構成試薬
CISH検出試薬A：ペルオキシダーゼ標識抗ジゴキシゲニンポリクローナル抗体(Fab')（動物種：ヤギ）
CISH検出試薬B：抗ペルオキシダーゼモノクローナル抗体(動物種：マウス)
CISH検出試薬C：ペルオキシダーゼ標識抗マウス IgG ポリクローナル抗体(Fab')(動物種：ヤギ)

文献

1) Janeway CA Jr, et al. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. 5th edition. New York: Garland Science; 2001. The structure of a typical antibody molecule. Available from: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK27144/.
2) Weiss LM, et al. Detection of immunoglobulin light-chain mRNA in lymphoid tissues using a practical in situ hybridization method. Am J Pathol. 1990 Oct;137(4):979-88.
3) Garcia CF, et al. Best practices in contemporary diagnostic immunohistochemistry: panel approach to hematolymphoid proliferations. Arch Pathol Lab Med. 2009 May;133(5):756-65.
4) Higgins RA, et al. Application of immunohistochemistry in the diagnosis of non-Hodgkin and Hodgkin lymphoma. Arch Pathol Lab Med. 2008 Mar;132(3):441-61.
5) Weiss LM, Loera S, Bacchi CE. Immunoglobulin light chain immunohistochemistry revisited, with emphasis on reactive follicular hyperplasia versus follicular lymphoma. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2010 May;18(3):199-205.
6) Hristov AC, et al. Kappa and lambda immunohistochemistry and in situ hybridization in the evaluation of atypical cutaneous lymphoid infiltrates. J Cutan Pathol. 2020 Nov;47(11):1103-1110.
7) Beck RC, et al. Automated colorimetric in situ hybridization (CISH) detection of immunoglobulin (Ig) light chain mRNA expression in plasma cell (PC) dyscrasias and non-Hodgkin lymphoma. Diagn Mol Pathol. 2003 Mar;12(1):14-20.
8) Stewart CJ, et al. Immunoglobulin light chain mRNA detected by in situ hybridisation in diagnostic fine needle aspiration cytology specimens. J Clin Pathol. 1996 Sep;49(9):749-54.
9) Rimsza LM, et al. Kappa and lambda light chain mRNA in situ hybridization compared to flow cytometry and immunohistochemistry in B cell lymphomas. Diagn Pathol. 2014 Jul 21;9:144.
10) 日本病理学会 編. ゲノム研究用・診療用病理組織検体取扱い規程. 羊土社. 2019.

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