免疫組織化学染色試薬ヒストファイン●ブリッジ試薬の添加・反応●ブロッキング試薬による処理（3vol％過酸化水素水による内因性ペルオキシダーゼ処理）●第一抗体［抗ALKモノクローナル抗体（5A4）（動物種：マウス）］または陰性コントロール［マウスIgG］の添加・反応●ペルオキシダーゼ標識エンパワー試薬の添加・反応●基質溶液の調製・添加・反応●対比染色●封 入対比染色試薬（ヘマトキシリン）にスライドを浸した後、流水洗する。脱水、キシレンによる透徹後、非水溶性封入剤で封入する。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ⑨基質緩衝液⑧発色基質精製水1mLに⑧発色基質1滴と、⑨基質緩衝液1滴を加えよく混合する。⑩発色試薬1滴を加え再び混合する。（調製後30分以内に使用することを推奨する。）切片の周囲の余分な水分を拭き取る。基質溶液調製切片が完全に覆われるように、⑦ペルオキシダーゼ標識エンパワー試薬を滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、30分間）ティッシュ切片が完全に覆われるように、③ブロッキング試薬を滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、5分間）切片が完全に覆われるように、④第一抗体または⑤陰性コントロールを滴下し、 湿潤箱中で反応させる。（常温、30分間）切片が完全に覆われるように、⑥ブリッジ試薬を滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、15分間）⑩発色試薬切片の周囲の余分な水分を拭き取る。③ブロッキング試薬④第一抗体または⑤陰性コントロール⑥ブリッジ試薬⑦ペルオキシダーゼ標識 エンパワー試薬切片が完全に覆われるように、調製した基質溶液を滴下し、湿潤箱中で反応させる。 （常温、10分間） PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）基質溶液精製水で洗浄する。71
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