免疫組織化学染色試薬ヒストファイン●ブロッキング試薬Ⅰによる処理（3vol％過酸化水素水による内因性ペルオキシダーゼ処理）●対比染色①ブロッキング試薬Ⅰ②第一抗体または③陰性コントロール④酵素・第二抗体標識ポリマー切片が完全に覆われるように、調製した基質溶液を滴下し、湿潤箱中で反応させる。 （常温、10分間）●第一抗体［抗ヒトHER2/ 遺伝子産物ポリクローナル抗体（動物種：ウサギ）］または陰性コントロール［ウサギイムノグロブリン］の添加・反応●酵素・第二抗体標識ポリマー［ペルオキシダーゼ標識抗ウサギIgGポリクローナル抗体（Fab'）（動物種：ヤギ）］の添加・反応●基質溶液の調製・添加・反応●封 入●参 考neu対比染色試薬（ヘマトキシリン）にスライドを浸した後、流水でよくすすぐ。水洗、脱水、キシレンによる透徹後、非水溶性封入剤で封入する。参考1：PBS 洗浄用 ・HER2キット(POLY)20テスト包装の場合、750mL×20回作製できる。 ・HER2キット(POLY)40テスト包装の場合、750mL×40回作製できる。参考2：抗原賦活化液 ・HER2キット(POLY)20テスト包装の場合、100mL×20回作製できる。 ・HER2キット(POLY)40テスト包装の場合、100mL×40回作製できる。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。⑤発色基質⑥発色試薬500μLに⑤発色基質1滴（約20μL）を加え、泡立てないように注意して混合する。（遮光して冷蔵（2−8℃）保存し、調製日中に使用する。）基質溶液調製切片が完全に覆われるように、①ブロッキング試薬Ⅰを滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、5分間）切片が完全に覆われるように、②第一抗体または③陰性コントロールを滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、30分間）切片が完全に覆われるように、④酵素・第二抗体標識ポリマーを滴下し、湿潤箱中で反応させる。 （常温、30分間）⑥発色試薬ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。注：試薬の取り扱いに気をつけ、使い捨て手袋等用いる。 PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回） PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回） PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）基質溶液注）泡立った場合は、泡 を取り除くか、泡を避 けて使用すること。重要PBSで洗浄する。（常温、3分間、1回）精製水で洗浄する。63
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