免疫組織化学染色試薬ヒストファイン●ブロッキング試薬Ⅰによる処理（3vol％過酸化水素水による内因性ペルオキシダーゼ処理）●第一抗体の添加・反応●酵素・第二抗体標識ポリマー［ペルオキシダーゼ標識抗マウスIgGポリクローナル抗体（Fab'）（動物種：ヤギ）］の添加・反応●基質溶液の調製・添加・反応●対比染色●封 入対比染色試薬（ヘマトキシリン）にスライドを浸した後、流水でよくすすぐ。水洗、脱水、キシレンによる透徹後、非水溶性封入剤で封入する。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。基質緩衝液発色基質注）混合時に泡立て ないように注意 すること。精製水1mLに発色基質1滴と、基質緩衝液1滴を加えよく混合する。 発色試薬1滴を加え再び混合する。（調製後は、遮光して冷蔵（2−8℃）保存し、一週間以内に使用する。）調製基質溶液切片が完全に覆われるように、ブロッキング試薬Ⅰを滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、5分間）切片が完全に覆われるように、第一抗体を滴下し、湿潤箱中で反応させる。（常温、30分間）切片が完全に覆われるように、酵素・第二抗体標識ポリマーを滴下し、湿潤箱中で反応させる。 （常温、30分間）発色試薬ティッシュ切片の周囲の余分な水分を拭き取る。 PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）PBSで洗浄する。（常温、3分間、3回）基質溶液注）泡立った場合は、泡を取り除くか、 泡を避けて使用すること。精製水で洗浄する。ブロッキング試薬Ⅰ第一抗体 抗エストロゲンレセプターモノクローナル抗体（1D5） あるいは第一抗体 抗プロゲステロンレセプターモノクローナル抗体（A9621A） あるいは陰性コントロール酵素・第二抗体標識ポリマー切片が完全に覆われるように、調製した基質溶液を滴下し、湿潤箱中で反応させる。 （常温、10分間）55
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